新基因AngRem104与Bardet-Biedl综合征2蛋白的相互作用

作者：张宏; 张艳玲; 侯平; 梁秀彬; 王海燕

来源：中华肾脏病杂志, 2005, 21(04): 21-24.

DOI：10.3760/j.issn:1001-7097.2005.04.005

• 酵母菌
• 双杂交系统技术
• Bardet-Biedl综合征
• 免疫沉淀
• AngRem104

目的 筛选与新基因AngRem104相互作用的蛋白,并验证AngRem104和BardetBiedl综合征2(BBS2)蛋白在哺乳动物细胞中的相互作用,为进一步研究AngRem104的生理功 能奠定基础。方法 构建AngRem104的酵母真核表达载体AngRem104-pGBKT7／c-myc.用以转 化酵母菌AH109,并与转化了成人肾脏cDNA文库的酵母菌Y187接合,筛选与AngRem104相互 作用的蛋白。从中挑选Bardet-Biedl综合征2蛋白进行免疫共沉淀,构建AngRem104-pcDNA3.1／ V5-His和BBS2-pCMV／c-myc融合表达载体,共转染HEK293T细胞。分别用小鼠抗人c-myc单 克隆抗体和小鼠抗人V5-HRP抗体进行免疫沉淀和免疫印迹,以验证AngRem104和BBS2蛋白 间的相互作用。结果 以AngRem104为诱饵蛋白在人肾脏cDNA文库中共筛选到包括BBS2在 内的7个与之存在相互作用的蛋白。免疫共沉淀结果显示,AngRem104-V5融合蛋白能够在cmyc抗体的免疫沉淀物中检测出来:在V5抗体的免疫沉淀物中也能检测到BBS2-c-myc融合 蛋白。结论AngRem104和BBS2蛋自在哺乳动物细胞中存在某种相互作用,为新基因 AngRem104功能探讨和Bardet-Biedl综合征发病机制的研究提供了有价值的线索。

• 单位
  北京大学; 北京大学第一医院