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摘要
目的制备蛋白质转导结构域4-铜锌超氧化物歧化酶(PTD4-Cu,Zn-SOD)融合蛋白。方法分别将pET16b-Cu,Zn-SOD蛋白和pET16b-PTD4-Cu,Zn-SOD重组质粒转化到大肠杆菌BL21感受态细胞E.coli BL21 DE3)中;加入诱导剂异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(终浓度0.84 mmol/L)孵育4h,诱导Cu,Zn-SOD和PTD4-Cu,Zn-SOD融合蛋白表达;经过溶菌酶和超声裂解细菌,取上清液,行15%SDS-PAGE电泳分析目的蛋白的表达情况。利用Ni-NTA His结合树脂在天然条件下纯化获得Cu,Zn-SOD蛋白和PTD4-Cu,Zn-SOD融合蛋白,采用Western blot法鉴定目的蛋白。结果 Western blot结果显示目的蛋白纯度为90%,可见分子量约为19 kDa的Cu,Zn-SOD蛋白条带和分子量约为20kDa的PTD4-Cu,Zn-SOD融合蛋白条带。结论成功制备了PTD4-Cu,Zn-SOD融合蛋白。
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