虹鳟fabp10基因真核表达载体构建、生物信息学及组织表达分析

作者：任广明; 林玉杰; 徐黎明; 赵景壮; 邵轶智; 卢彤岩^*

来源：水产学杂志, 2023, 36(01): 1-7.

• 虹鳟
• fabp10
• 真核表达载体
• 脂质代谢

为探究虹鳟(Oncorhynchus mykiss)脂肪酸结合蛋白10(fatty acid binding protein 10,fabp10)基因序列信息及其所编码蛋白的结构和功能等，本试验根据Gen Bank数据库公布的河鳟(Salmo trutta)fabp10基因的CDS序列信息设计引物，通过RT-PCR获得fabp10基因片段，将目的片段与p MD-18-T载体连接转化DH5α感受态细胞，构建p MD-18-T-fabp10克隆载体，双酶切回收基因片段，构建pc DNA3.1-fabp10真核表达载体，分析fabp10基因在虹鳟不同组织中的表达，经双酶切、测序鉴定构建成功。将表达载体转染至EPC细胞，分别于24h、36 h、48 h后收集细胞进行荧光定量PCR检测。结果显示：虹鳟fabp10基因CDS区与Gen Bank数据库中Salmo trutta fabp10基因CDS区同源性高达100%。生物信息学分析发现，fabp10基因编码区全长378 bp，编码126个氨基酸。Fabp10蛋白主要分布在细胞质中，存在23个潜在磷酸化位点。转染pc DNA3.1-fabp10可显著提高EPC细胞中fabp10 m RNA的表达(P<0.05)。RT-q PCR结果显示：fabp10基因在肝脏中表达丰度最高，随之为肾脏、肌肉、肠、脾脏、心脏，在脑中表达量最低。本试验成功扩增出fabp10基因CDS区并构建了真核表达载体，成功预测分析了其结构和功能，为研究虹鳟机体脂质代谢过程提供了基础。

• 单位
  中国水产科学研究院黑龙江水产研究所