高效液相色谱-串联质谱法在检测绝经后妇女血清中雌激素及其代谢物中的应用

作者：杨娜; 陈捷; 李美娟; 葛佳佳; 张潇莉; 王敏; 朱怀军; 成晓亮; 顾林; 葛卫红^*

来源：临床检验杂志, 2022, 40(10): 756-762.

DOI：10.13602/j.cnki.jcls.2022.10.09

• 雌激素
• 高效液相色谱-串联质谱法
• 雌酮
• 雌二醇
• 绝经

目的 建立一种高灵敏度的高效液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS),分析绝经后妇女血清中包含雌酮(E1)、雌二醇(E2)及其羟基化、甲基化、葡萄糖醛酸结合/硫酸结合(-G/S)等代谢产物的水平。方法 采用叔丁基甲醚液-液萃取法，结合β-葡萄糖醛酸苷酶/芳基硫酸酯酶水解及丹磺酰氯对萃取后的血清样品进行衍生化处理。以同位素标记的雌酮-d4作为内标，采用Waters UPLCⅠ-Class/Xevo TQS液质联用系统测定。以ACQUITY UPLC BEH C18 (2.1 mm×100 mm, 1.7μm)为色谱柱，水/甲醇(含0.05%甲酸和2 mmol/L甲酸铵)为流动相，0.3 mL/min流速梯度洗脱。柱温为50℃,进样量10μL。电喷雾离子源(ESI)正离子模式下扫描，多重反应监测(MRM)下测定，分析时间7 min。结果 各类雌激素定量下限低至1～2 pg/mL,平均加标回收率在90.3%～111.3%之间。绝经后妇女血清各类雌激素总量远高于临床常规雌激素指标E2的水平，并以E1-G/S和16α-羟基雌酮结合型(16OHE1-G/S)水平相对较高。各类雌激素-G/S结合型水平均不低于其游离型水平。2-羟化和16-羟化通路为优势代谢通路。结论 该方法灵敏度高、分析时间短、特异性强，可用于临床绝经后妇女血清样本中微量雌激素及代谢物的定量分析。

• 单位
  南京市妇幼保健院; 南京大学医学院附属鼓楼医院