微小RNA在HBx缺失突变体致肝细胞增殖中的作用及其机制

作者：符小玉; 谭德明; 侯周华; 胡志亮; 刘国珍; 欧阳奕; 刘菲

来源：中华肝脏病杂志, 2012, (08): 598-604.

• 癌,肝细胞
• RNA
• 肝炎病毒,乙型
• 突变
• 细胞增殖

目的研究微小RNA(miRNA)在HBx缺失突变体致人肝细胞异常增殖中的作用及其相关机制。方法利用miRNA芯片技术检测稳定表达HBx-d382及HBx的L02(即分别含HBx基因缺失突变体HBx-d382及野生型HBx基因)细胞系中miRNA的表达,实时荧光定量PCR对上述miRNA进行验证。选取在L02/HBx-d382和L02/HBx细胞中均表达明显下调的两个miRNA:miR-338-3P、miR-551b进行功能研究,分为实验组(转染miRNA模拟物组)、阴性对照组(NC,转染miRNA阴性对照)及脂质体组(lipo,单加转染试剂),通过脂质体转染到细胞中,四甲基偶氮唑盐法检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞周期,实时荧光定量PCR和Western blot检测细胞周期蛋白D1、细胞周期蛋白G1和E2F转录因子的改变。采用SPSS 16.0统计软件,数据均进行了正态检验并符合正态性,组间均数比较采用成组t检验。结果 (1)与L02/pcDNA3.0细胞比较,L02/HBx-d382细胞有6个miRNA表达上调,5个miRNA表达下调;L02/HBx细胞有4个miRNA表达上调,12个miRNA表达下调。实时荧光定量PCR验证的结果与芯片相一致。(2)转染了miR-338-3p-模拟物和miR-551b-模拟物后,L02/HBx-d382及L02/HBx细胞增殖均受抑制,细胞周期均阻滞在G1期,细胞增殖能力减弱。L02/HBx-d382细胞中,细胞增殖能力:lipo组、NC组、miR-338-3p组和miR-551b组分别为90.0%±1.3%、88.0%±1.6%、56.0%±6.1%和62.0%±6.4%,miR-338-3p组与:lipo组、NC组比较,t值分别为10.402、9.133;miR-551b组和与lipo组、NC组比较,t值分别为8.763、7.403,P值均<0.01。L02/HBx细胞中,细胞增殖能力:lipo组、NC组、miR-338-3p组和miR-551b组分别为91.0%±1.7%、89.0%±2.1%、60.0%±7.7%和66.0%±9.3%,miR-338-3p组与lipo组、NC组比较,t值分别为9.105、8.074;miR-551b组与lipo组、NC组比较,t值分别为7.673、7.52,P值均<0.01。实时荧光定量PCR检测结果显示细胞周期蛋白D1、细胞周期...

• 单位
  中南大学湘雅医院