内含肽介导谷氨酰胺转胺酶酶原的活化

作者：杜坤; 周丽; 堵国成; 陈坚; 周哲敏

来源：食品科学, 2013, 34(09): 90-94.

• 蛋白质剪接技术
• 内含肽
• 酶原活化
• 谷氨酰胺转胺酶
• 吸水链霉菌

链霉菌来源的谷氨酰胺转胺酶(microbial transglutaminase,MTG)以酶原(pro-MTG)的形式表达,需要蛋白酶将其活化。蛋白酶有降解MTG及其底物的可能,且增加MTG的分离纯化成本。为解决上述问题,将一种pH值依赖型的内含肽(intein)插入pro区和MTG之间,用以介导二者之间的断裂,实现MTG的pH值控制活化。结果表明:重组蛋白(pro-Intein-MTG)在大肠杆菌中实现了可溶高表达。在pH7.0、25℃的体外环境下,重组蛋白经24h即可完全转化为MTG,且最高酶活力为0.23U/mL(菌体浓度稀释至OD600nm为1.0时测得)。重组型MTG的酶比活力和Km值分别为14.3U/mg、69.4mmol/L,与野生型MTG相近;且圆二色谱显示二者具有相似的二级结构,说明内含肽的插入对于MTG的功能和结构无显著影响。

• 单位
  食品科学与技术国家重点实验室; 江南大学; 工业生物技术教育部重点实验室