Let-7b靶向抑制树突状细胞Bach1通过激活HO-1调控肠黏膜的损伤修复

作者：田元元; 覃晓日; 田阁; 符雪婷; 孙晓宁^*

来源：实用医学杂志, 2022, 38(23): 2933-2941.

DOI：10.3969/j.issn.1006-5725.2022.23.008

• 小RNA Let-7b
• TB和CNC同源性1
• 血红素加氧酶-1
• 炎症性肠病

目的 观察炎症性肠病（IBD）小鼠模型中Let-7b的表达特征，分析Let-7b对树突状细胞（DCs）中血红素加氧酶1/TB和CNC同源性1(Bach1/HO-1)轴的调控机制，从而探讨其对肠黏膜上皮细胞（MCEC）伤口修复的机制。方法 建立IBD小鼠模型，分为正常组和模型组。培养DCs细胞和小鼠MCEC。将DCs细胞分为7组，其中包括Ⅰ：空白对照组；Ⅱ：Let-7b拟似物阴性对照组；Ⅲ：Let-7b拟似物转染组；Ⅳ：Let-7b抑制剂阴性对照组；Ⅴ：Let-7b抑制剂转染组；Ⅵ：Let-7b抑制剂联合Bach1抑制剂盐酸表小檗碱（EC）干预组；Ⅶ：Let-7b抑制剂、EC、HO-1抑制剂锌原卟啉（ZnPP）共处理干预组。采用qRT-PCR和Western blot法检测结肠组织和DCs中Let-7b的表达及DCs培养物上清液中Bach1和HO-1表达水平。并将各组DCs培养物上清液与结肠黏膜上皮细胞共培养，随后用5-乙炔基-2′-脱氧尿苷（Edu）试剂盒法检测结肠黏膜上皮细胞的细胞增殖率。伤口愈合实验检测细胞的损伤修复能力。荧光素酶基因报告实验分析Let-7b与Bach1的3′UTR区域的直接结合作用。结果 Let-7b在模型小鼠中表达降低（P <0.05），与Bach1表达呈负相关（P <0.05），而与HO-1呈正相关（P <0.05）。DCs中成功过表达了Let-7b或抑制了Let-7b，发现细胞培养物上清液Bach1受到Let-7b的负调控（P <0.05），而细胞培养物上清液中HO-1受到正调控（P <0.05）。机制研究显示了DCs中Bach1是Let-7b的靶基因，而HO-1是下游靶基因。另外，各组细胞培养物上清液与结肠黏膜上皮细胞共培养后，观察到Let-7b拟似物可以明显抑制Bach1向细胞外表达并促进细胞培养物上清液中HO-1的表达，从而促进结肠黏膜上皮细胞的增殖和伤口愈合（均P <0.05）。结论 Let-7b靶向抑制DCs的Bach1并激活HO-1促进肠黏膜上皮细胞的增殖和修复。表明调控Let-7b/Bach1/HO-1轴可能是治疗IBD的潜在靶点。

• 单位
  海南医学院第二附属医院; 海南医学院; 海南省人民医院