2-脱氧核糖-5-磷酸醛缩酶在毕赤酵母中的分泌表达

作者：刘松; 聂挺; 陆豫; 王水兴; 余勃

来源：南昌大学学报(理科版), 2014, 38(01): 74-78.

DOI：10.13764/j.cnki.ncdl.2014.01.016

• 2-脱氧核糖-5-磷酸醛缩酶
• 毕赤酵母
• 分泌表达

为实现2-脱氧核糖-5-磷酸醛缩酶基因(DERA)在毕赤酵母中分泌表达。通过PCR从E.coli BL21基因组中扩增获得DERA序列,并且与毕赤酵母分泌表达载体pPIC9K进行连接,构建得到重组质粒pPIC9K-DERA。重组载体经salⅠ单酶切线性化后电击转化至毕赤酵母GS115感受态细胞,用MD/MM平板筛选阳性株并在含G418的YDP培养基中筛选多拷贝插入菌株。经PCR鉴定获得一株插入pPIC9K-DERA的多拷贝嗜甲醇重组毕赤酵母菌株。用甲醇诱导该重组菌株,分泌得到具有活性的2-脱氧核糖-5-磷酸醛缩酶,且72 h时酶活为2.4 U·mg-1。结果表明,2-脱氧核糖-5-磷酸醛缩酶可实现在毕赤酵母中分泌表达。

• 单位
  南昌大学; 环境与化学工程学院; 中德联合研究院