摘要
目的 探究非酒精性脂肪性肝炎(NASH)早期Yes-相关蛋白(YAP)活性变化特点及其与胆管反应(DR)发生的时空关系。方法通过蛋氨酸胆碱缺乏(MCD)饮食、硫代乙酰胺(TAA)饮食喂养雄性C57BL/6J小鼠12周,构建NASH小鼠模型。通过HE、Masson染色评估肝脏病理学改变,qPCR技术检测YAP及其靶基因(Ctgf、Cyr61、Acta2)的mRNA表达情况;免疫印记检测YAP的总蛋白表达水平;免疫组化检测YAP、DR标志(K19和Sox9)表达与分布情况。结果 在MCD饮食诱导的NASH疾病早期(1~4周),肝组织YAP及其靶基因Ctgf、Cyr6、Acta2的m RNA表达量和YAP总蛋白表达量均增加(P0.05),且YAP阳性胆管样细胞数量逐渐增加(P<0.001)。在TAA饮食诱导的NASH疾病早期(3 d~2周),肝组织YAP及其靶基因Ctgf、Cyr6、Acta2的mRNA表达量和YAP总蛋白表达量均增加(P<0.05)。YAP阳性肝细胞数量在2周达到峰值69.2/×400视野;4周减少至55.2/×400视野(P<0.001),并且在中央静脉附近(即DR发生初始位置)观察到YAP阳性胆管样细胞。6~12周时可在中央静脉周围肝小叶中观察到大量的K19/Sox9阳性DR细胞(P<0.01),同时YAP阳性肝细胞数量持续减少(P<0.001),YAP阳性胆管样细胞数量持续增加(P<0.001)。结论 NASH损伤肝脏组织中,YAP激活早于DR发生,YAP活性变化特点及其分布与DR发生分布具有时空相关关系,同时肝细胞内的YAP激活似乎可以诱导肝细胞转分化为胆管样细胞,参与DR发生。
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单位中心实验室; 南方医科大学