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摘要
目的:构建一种新的复制子为RSF的温度调控型原核表达载体,以满足多蛋白共表达时对不同复制子表达载体的需求。方法:利用Xho I和Xba I双酶切pRSF-Duet-1获得RSF复制子序列和卡那霉素抗性筛选基因KanR,从p BV220载体中PCR扩增温度调控型启动子PL/R序列,将这两段序列酶连转化并经卡那霉素筛选后得到新的原核表达载体pRSF-PL。将增强绿色荧光蛋白(EGFP)基因克隆到该载体中进行EGFP表达检测。结果:pRSF-PL载体含有预期的RSF复制子序列和PL/R启动子。该载体在表达EGFP基因时,30℃和37℃条件下诱导的EGFP蛋白表达水平低,42℃条件下能实现EGFP蛋白的大量表达。结论:成功构建了以RSF为复制子的温度调控型高效原核表达载体pRSF-PL。
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