人Plk3基因真核表达载体的构建及蛋白表达和定位

作者：沈涛; 李妍; 杨蕾; 郭然; 陈之光; 郭洲洋; 巴根; 付勤

来源：解剖科学进展, 2017, 23(01): 13-19.

DOI：10.16695/j.cnki.1006-2947.2017.01.004

• hPlk3
• Western blot
• 绿色荧光蛋白
• 质粒构建
• COS-7细胞

目的构建hPlk3真核表达载体并证实融合蛋白在细胞内的表达及定位。方法提取工具细胞Hela的mRNA,反转录为cDNA。PCR扩增hPlk3基因cDNA全长,并将其亚克隆至pEGFP-C1表达载体中。然后将构建的重组质粒进行酶切和测序鉴定,并转染到工具细胞COS-7中,提取细胞蛋白进行Westernblot检测其表达。最后利用激光共聚焦扫描显微镜观察pEGFP-hPlk3在COS-7细胞内的定位。结果hPlk3基因cDNA全长克隆到了真核表达载体pEGFP-C1中,酶切鉴定片段为1941bp,并测序成功。Westernblot检测到了GFP-hPlk3融合蛋白表达,分子量约为98kDa。pEGFP-hPlk3在COS-7细胞中主要定位于细胞质和核周。结论成功构建了hPlk3基因cDNA全长的真核表达载体,pEGFP-hPlk3蛋白在COS-7细胞中主要定位于细胞质和核周。

• 单位
  基础医学院; 中国医科大学; 中国医科大学附属盛京医院