摘要

背景:星形胶质细胞对脊髓损伤后神经元的修复具有重要作用,有研究证明山楂叶总黄酮可促进大鼠脊髓损伤后运动功能恢复,山楂叶总黄酮是否影响星形胶质细胞促进神经元修复仍不清楚。目的:探索山楂叶总黄酮调控星形胶质细胞治疗脊髓损伤的分子机制。方法:构建脊髓星形胶质细胞与脊髓神经元transwell共培养模型,对照组为正常脊髓星形胶质细胞和正常脊髓神经元;损伤组为正常脊髓星形胶质细胞和损伤脊髓神经元;药物组为125μg/mL山楂叶总黄酮干预的正常脊髓星形胶质细胞和损伤脊髓神经元。荧光探针DCFH-DA检测脊髓神经元内活性氧的生成;实时荧光定量PCR检测脑源性神经营养因子、神经生长因子、转录因子4的表达;Western blot检测脑源性神经营养因子、神经生长因子、Wnt/β-catenin通路关键蛋白GSK-3β、phsopho-GSK-3β(ser9)、β-catenin及转录因子4的表达;免疫荧光观察Wnt/β-catenin通路关键蛋白β-catenin的表达。结果与结论:(1)损伤组活性氧生成远高于对照组(P <0.001);药物组活性氧生成低于损伤组(P <0.01),高于对照组(P <0.001);(2)药物组脑源性神经营养因子、神经生长因子基因及蛋白表达高于对照组与损伤组(P <0.01);(3)与对照组、损伤组相比,药物组phsopho-GSK-3β(ser9)蛋白表达增加(P <0.001),β-catenin蛋白表达增加(P <0.001),转录因子4基因及蛋白表达增加(P <0.01);(4)结果表明,山楂叶总黄酮可以减轻脊髓神经元的氧化损伤,激活星形胶质细胞Wnt/β-catenin通路,结合转录因子4启动转录,促进其分泌神经营养因子,实现对脊髓神经元的修复。