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摘要
目的研究雷帕霉素(RAP)调控巨噬细胞表型对肺动脉高压(PAH)的影响及其作用机制。方法建立PAH大鼠模型,随机分为对照组、PAH组和PAH+RAP组,每组10只。造模后5 d分别给予对照组溶媒和PAH+RAP组RAP肌肉注射。通过右心导管检测平均肺动脉压(m PAP),并称量左右心室、室间隔以计算右心室肥厚指数(RVHI)。通过免疫组化技术评价巨噬细胞浸润程度和肺小动脉平滑肌细胞增殖程度,免疫印迹技术检测α-SMA蛋白表达水平,免疫荧光检测M2型巨噬细胞表达水平。利用RT-PCR检测各组TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10mRNA表达水平。体外培养巨噬细胞,分别给予LPS+INF-γ、IL-4和RAP干预,并将细胞分为空白对照组、LPS+INF-γ干预组、IL-4干预组和LPS+INF-γ+RAP干预组;流式细胞术检测巨噬细胞表型,RT-PCR检测以上各炎性因子mRNA表达水平。结果成功建立了PAH大鼠模型。PAH组的m PAP、RVHI、α-SMA蛋白表达水平、巨噬细胞浸润程度以及炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10 mRNA的表达水平均高于对照组(P<0.05)。PAH+RAP组的m PAP、RVHI、α-SMA蛋白表达水平以及炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10 mRNA的表达水平均低于PAH组(P<0.05)。PAH+RAP组M2型巨噬细胞相对表达水平高于PAH组(P<0.05)。体外实验中,LPS+INF-γ干预组的CD86阳性巨噬细胞百分比及TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10 mRNA相对表达水平均高于空白对照组(P<0.05);LPS+IFN-γ+RAP干预组的CD86阳性巨噬细胞百分比及TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10 mRNA相对表达水平均低于LPS+INF-γ干预组(P<0.05)。结论 PAH的发生伴随着巨噬细胞浸润及炎性因子表达水平的升高;RAP可通过诱导巨噬细胞向M2型转化,从而降低炎性因子表达水平,进而改善PAH。
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