一种原代小胶质细胞培养与纯化方法的改良

作者：徐蛟天; 边立功; 张琰; 王威; 陈孝祥; 陈鑫月; 李庆; 邓兴力

来源：中风与神经疾病杂志, 2018, 35(02): 115-118.

DOI：10.19845/j.cnki.zfysjjbzz.2018.02.005

• 小胶质细胞
• 细胞培养
• 细胞纯化

目的建立一种简易高效的新生大鼠小胶质细胞的原代培养和纯化方法,提高小胶质细胞的产量以及纯度。方法在传统Miriam Mecha的混合胶质细胞培养方法的基础上通过改良操作,混合培养小胶质细胞,并分别采用手拍法、摇床法以及温和胰酶消化法,纯化小胶质细胞,通过差速贴壁进一步纯化细胞。荧光显微镜下标记小胶质细胞的特异性标记物Iba1、CD11b/c进行鉴定。结果 (1)分离培养第1天小胶质细胞呈不规则圆形,折光不均匀,继续培养35 d,小胶质细胞逐渐出现单极或多极突起,7 d时部分细胞转为静止状态,呈分枝状;(2)纯化后小胶质细胞多呈静息状态,细胞免疫荧光CD11b/c、Iba1双阳性;(3)不同纯化方法细胞免疫荧光并计数显示:手拍法纯化小胶质细胞,细胞阳性率(>96%)明显高于胰酶消化法(>90%,P<0.05),前者细胞产量明显高于摇床法(P<0.05)。结论通过改良传统Miriam Mecha的混合小胶质细胞的培养和纯化方法,可以提高小胶质细胞产量以及纯度。

• 单位
  昆明医科大学; 昆明医科大学第一附属医院; 基础医学院; 神经内科