ALKBH5对紫外线诱导的晶状体上皮细胞氧化损伤模型中DNA损伤修复的影响

作者：李鹏飞; 鲍思洁; 王从玉; 王思文; 孙诚浩; 康丽华; 管怀进^*

来源：眼科新进展, 2022, 42(11): 847-862.

DOI：10.13389/j.cnki.rao.2022.0175

• 年龄相关性白内障
• DNA损伤修复
• 晶状体上皮细胞
• 紫外线B
• 6-甲基腺苷" name="keyword">N6-甲基腺苷
• ALKBH5

目的 探究N6-甲基腺苷(m6A)去甲基化酶ALKBH5对紫外线诱导的晶状体上皮细胞(LEC)氧化损伤模型中DNA损伤修复的影响。方法 运用qRT-PCR和免疫印迹实验检测年龄相关性白内障(ARC)患者和对照组晶状体前囊膜上皮细胞中ALKBH5的mRNA和蛋白的表达。通过紫外线B(UVB)构建晶状体上皮细胞株SRA01/04细胞氧化损伤模型和靶向ALKBH5设计小干扰RNA(siRNA)转染构建敲降模型，运用qRT-PCR和免疫印迹实验检测氧化损伤模型和敲降模型中ALKBH5的mRNA和蛋白表达。运用CCK-8法检测Control组、UVB组、UVB+siNC组和UVB+siALKBH5#3组中SRA01/04细胞活力变化。免疫荧光染色检测UVB+siNC组和UVB+siALKBH5#3组中15A3的荧光强度变化。运用qRT-PCR检测转染对照siNC组和转染siALKBH5#3组中11个DNA氧化损伤修复基因(ODRGs)的mRNA表达变化。结果 在ARC患者的晶状体前囊膜上皮细胞中，ALKBH5的mRNA和蛋白表达水平均显著升高。在UVB以时间梯度诱导SRA01/04的细胞氧化损伤模型中，ALKBH5的mRNA和蛋白表达水平均呈上升后下降趋势，其中UVB照射10 min后ALKBH5 mRNA和蛋白表达升高最为显著。ALKBH5敲降效率结果显示，与转染对照siNC组相比，转染靶向ALKBH5的siRNA后，ALKBH5的mRNA和蛋白表达均显著下降。CCK-8法检测结果显示，与UVB+siNC组相比，UVB+siALKBH5#3组SRA01/04细胞活力明显降低。免疫荧光染色检测结果显示，与UVB+siNC组相比，UVB+siALKBH5#3组SRA01/04细胞内DNA氧化损伤指标15A3染色显著增加。同时，与转染对照siNC组相比，转染ALKBH5#3组SRA01/04细胞的ODRGs中，TREX1、FANCD2、LIG1、MSH2、MSH3、RPA2、SMUG1、XRCC6 mRNA的表达均显著上升，DCLRE1A mRNA的表达显著下降，MGMT和MRE11A mRNA的表达则未见明显差异。结论 m6A去甲基化酶ALKBH5在UVB诱导的LEC氧化损伤模型中诱导性表达上升，敲降ALKBH5可促进LEC内大部分ODRGs表达升高，参与调控LEC内损伤DNA的修复，阻止ARC的发生。

• 单位
  南通大学; 南通大学附属医院