温阳解郁颗粒调节BDNF/TrkB/ERK信号通路保护皮质酮诱导损伤型海马神经细胞的作用机制研究

作者：马小娟; 孟霜; 冯振宇; 史敏; 王鑫鑫; 周晓荣; 赵杰^*

来源：世界科学技术-中医药现代化, 2022, 24(09): 3504-3515.

• 温阳解郁颗粒
• 小鼠海马神经细胞
• 皮质酮
• BDNF/TrkB/ERK信号通路
• 作用机制

目的 观察温阳解郁颗粒（Wenyang Jieyu granule,WYJY）对皮质酮（Corticosterone,CORT）诱导损伤型小鼠海马神经细胞（TH22 cell）的保护作用，基于脑源性神经营养因子（Brain derived neurotrophic factor, BDNF）/酪氨酸激酶B(Tyrosine kinase B, TrkB)/细胞外信号调节蛋白激酶（Extra cellular regulated protein kinases, ERK）信号通路探讨WYJY保护海马神经细胞的作用机制。方法 体外构建小鼠海马神经细胞皮质酮诱导损伤模型，以不同浓度的WYJY和氟西汀（Fluoxetine,FXT）含药血清作用于模型细胞，细胞增殖-毒性检测（Cell Counting Kit-8, CCK-8）法分析细胞活性，倒置显微镜下观察给药前后细胞形态结构的改变，采用蛋白免疫印迹法（Western Blot）、实时荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR, qPCR)法检测神经细胞内凋亡因子（BCL2-Associated X, Bax）、抗凋亡因子（B-cell lymphoma-2, Bcl-2）、BDNF、Trkb、ERK以及丝氨酸/苏氨酸激酶（Phospho-p90RSK, RSK）、环磷腺苷效应元件结合蛋白（cAMP-response element binding protein, CREB）蛋白表达水平以及相关基因的表达水平。结果 在浓度为459.5μmol·L-1的CORT作用24 h后，HT22细胞的活性抑制率达到50%，在此条件作用下细胞形态结构损伤明显，凋亡程度严重，细胞上清中BDNF的含量显著减少（P<0.05），细胞内凋亡相关因子Bcl-2/Bax的比值明显降低（P<0.01）,BDNF、Trkb、ERK、RSK、CREB磷酸化蛋白表达水平和mRNA表达水平明显降低（P<0.01）；以5%的浓度为2.85 g·kg-1的WYJY和10%的FXT含药血清作用于受损的HT22细胞后，HT22细胞存活率明显提升（P<0.01），细胞结构的损伤明显改善，细胞凋亡程度减轻，细胞外BDNF的含量显著升高（P<0.05），细胞内Bcl-2/Bax比值显著上调（P<0.01）,BDNF、Trkb、ERK、RSK、CREB磷酸化蛋白表达水平和mRNA表达水平显著提升（P<0.05,P<0.01）。结论 温阳解郁颗粒可有效保护高浓度CORT造成的小鼠海马神经细胞损伤。调控BDNF/Trkb/ERK通路，放大CREB信号传导，影响Bcl-2、BDNF水平，可能是其保护海马神经元，发挥抗抑郁疗效的重要机制。

• 单位
  山西中医药大学; 山西省中西医结合医院; 中心实验室