尼罗罗非鱼CD2-like基因克隆及其胞外区表达研究

作者：陈福暖; 高晓琳; 曾晓怜; 谢彩霞; 汪志文; 鲁义善; 吴灶和; 王忠良; 王蓓^*

来源：水产科学, 2021, 40(05): 700-709.

DOI：10.16378/j.cnki.1003-1111.20032

• 尼罗罗非鱼
• CD2-like基因
• 基因克隆
• 原核表达

依据数据库中预测的尼罗罗非鱼白细胞分化抗原2(CD2)基因(GenBank登录号:XM005460661.4)序列,采用PCR扩增体质量(150±50) g尼罗罗非鱼CD2分子同源类似物(CD2-like)基因编码区片段,然后以其胞外区构建原核表达质粒pGEX-6P1-CD2L,并进行原核表达及条件优化,最后进行复性纯化,为进一步研究该CD2-like分子在罗非鱼中的免疫功能奠定基础。研究结果表明,罗非鱼CD2-like(OnCD2-like)基因(GenBank登录号:MN296489)编码区全长1110 bp,其中胞外区长558 bp。构建OnCD2-like胞外区的原核表达质粒pGEX-6P1-CD2L,将该重组质粒导入大肠杆菌BL21后,成功表达OnCD2-like胞外段重组蛋白。原核表达结果显示,目的蛋白分子质量为20 ku,主要以包涵体形式存在,而该包涵体蛋白复性纯化最佳条件为:37℃下,0.2 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导6 h,经梯度稀释复性并纯化后可成功获得目的重组蛋白。

• 单位
  广东省水产经济动物病害控制重点实验室; 广东省水产经济动物病原生物学及流行病学重点实验室; 广东海洋大学深圳研究院; 广东海洋大学