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摘要
目的构建含HBV全基因组1.3倍体(1.3 ploid HBV,HBV 1.3P)的HepG2细胞模型,并观察HBV生物标志物的表达规律。方法通过腺病毒将全基因组合成的1.3倍HBV序列转染入Hep G2细胞中,构建HBV 1.3P-HepG2细胞模型,采用琼脂糖凝胶电泳鉴定HBV 1.3P重组腺病毒质粒,利用ABI 3730测序仪确定重组腺病毒质粒中含有正确的1.3倍HBV序列,荧光显微镜下鉴定HBV 1.3P腺病毒感染HepG2细胞的最佳感染复数(MOI),qRT-PCR测定09 d HBV 1.3P-HepG2细胞模型中HBV DNA、ccc DNA的表达水平,化学发光法、免疫荧光法分别检测上清液及细胞内HBsAg、HBeAg的表达量。计量资料多组间比较采用方差分析,进一步两两比较采用SNK-q检验。结果当MOI=40时,HepG2细胞被HBV 1.3P重组腺病毒感染的效率达到90%以上;在感染第2天即可分别在上清液和细胞内中检测出HBV DNA、ccc DNA、HBsAg及HBeAg等标志物的表达,在46 d达到峰值水平,7 d之后逐渐下降。结论所构建的HBV全基因组1.3倍体HepG2细胞模型能稳定表达HBV标志物,为开展HBV的相关研究奠定了基础。
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单位上海中医药大学附属曙光医院; 广西中医药大学第一附属医院
