重组钩端螺旋体多抗原位点同源合成基因的表达及活性鉴定

作者：张士尧; 浦昀; 徐坤; 李金华; 原野; 鞠文; 李娟

来源：吉林大学学报(医学版), 2012, (03).

• 钩端螺旋体
• 原核表达
• 融合蛋白
• 活性鉴定 Le pt os pi r a
• pr okar yoti c expr essi on
• f usi on pr ot ei n
• acti vit y i denfifi cati on

目的: 构建重组钩端螺旋体( 钩体) 优势抗原表位原核表达系统, 以期获得高纯度的钩体优势抗原表位重组融合蛋白, 为进一 步研 究 钩 体快 速 检 测 方 法 奠 定 基 础。方 法: 利 用 基 因 重 组 的 方 法 构 建 表 达 质 粒p E T- r LP。经I P T G诱导后, 获得高效表达带组氨酸标签的以包涵体形式存在的融合蛋白, 包涵体蛋白经尿素变性溶解, 采用镍离子亲和纯化, 利用SDS- P AGE、West er n bl ot ti ng和间接ELI S A法鉴定。结果: 在相对分子质量为20 000处有1条特异性蛋白条带, 为重组钩体优势抗原表位融合蛋白;ELI S A结果显示其可与钩体阳性血清特异性结合, 而与其他血清无交叉反应。结论: 成功构建重组钩体优势抗原表位原核表达系统, 并获得高纯度的重组钩体优势抗原表位融合蛋白。

• 单位
  吉林出入境检验检疫局; 吉林大学