雷帕霉素介导P53选择性自噬对急性肝损伤和肝纤维化大鼠的干预作用

作者：白阳秋; 罗晓英; 李修岭; 张炳勇^*

来源：中华实用诊断与治疗杂志, 2022, 36(10): 1006-1011.

DOI：10.13507/j.issn.1674-3474.2022.10.009

• 急性肝损伤
• 肝纤维化
• 选择性自噬
• P53
• 肝细胞
• 大鼠

目的 观察四氯化碳(carbon tetrachloride, CCl4)诱导的急性肝损伤和肝纤维化大鼠应用雷帕霉素处理后肝脏炎症、纤维化程度及原代肝细胞P53和自噬相关蛋白P62、LC3B表达变化，探讨雷帕霉素对急性肝损伤和肝纤维化的干预作用及可能机制。方法 36只SD雄性大鼠随机分为雷帕霉素组、模型组和对照组各12只。模型组、雷帕霉素组大鼠腹腔注射含体积分数40%CCl4的橄榄油溶液2 mL/kg, 2次/周，连续4周，制备急性肝损伤、肝纤维化模型；对照组腹腔注射等量橄榄油。雷帕霉素组自造模第1天起腹腔注射雷帕霉素1.5 mg/(kg·d),连续4周；对照组和模型组腹腔注射等量生理盐水。注射CCl4第6、28天，3组随机各取6只大鼠，腹腔注射质量分数3%戊巴比妥钠1 mL/kg麻醉后经下腔静脉取血，检测血清谷丙转氨酶(glutamic-pyruvic transaminase, GPT)、谷草转氨酶(glutamic-oxaloacetic transaminase, GOT)水平；行肝脏原位灌注，剪取肝左叶组织行HE染色，采用Ishak评分评估肝组织炎症坏死和纤维化程度，剩余肝组织提取原代肝细胞。取3组大鼠原代肝细胞，采用Western blot法检测P53、P62、LC3B蛋白相对表达量，采用免疫荧光染色法检测P53和LC3B共表达情况。结果 (1)对照组注射CCl4第6、28天肝细胞结构清晰、排列规则；模型组注射CCl4第6天肝细胞水肿、气球样变性，汇管区炎症明显，注射CCl4第28天肝纤维化形成；雷帕霉素组注射CCl4第6天肝细胞炎症坏死程度较模型组明显减轻，注射CCl4第28天肝细胞炎症坏死和纤维化程度较模型组明显减轻。(2)注射CCl4第6、28天Ishak炎症坏死评分及第28天Ishak纤维化评分在模型组[(12.17±1.94)、(8.33±3.27)、(3.17±0.75)分]、雷帕霉素组[(5.17±1.47)、(5.00±1.41)、(1.50±0.83)分]均高于对照组(0、0、0)(P<0.05),在雷帕霉素组均低于模型组(P<0.05)。(3)注射CCl4第6、28天血清GPT、GOT水平在模型组[GPT(445.18±157.17)、(215.85±74.79)u/L,GOT(243.86±74.37)、(140.85±39.31)u/L]、雷帕霉素组[GPT(120.54±37.70)、(40.78±17.80)u/L,GOT(95.54±31.54)、(27.45±9.48)u/L]均高于对照组[GPT(8.34±3.90)、(9.87±5.15)u/L,GOT(4.84±3.14)、(5.04±3.49)u/L](P<0.05),在雷帕霉素组均低于模型组(P<0.05)。(4)注射CCl4第6、28天，模型组原代肝细胞P62(0.973±0.422、1.213±0.390)、P53(1.790±0.473、2.529±2.215)蛋白相对表达量均高于雷帕霉素组[P62(0.324±0.155、0.496±0.191),P53(0.789±0.270、0.716±0.179)]、对照组[P62(0.166±0.050、0.492±0.193),P53(0.912±0.047、0.067±0.032)](P<0.05),LC3B(0.085±0.031、0.059±0.025)均低于雷帕霉素组(0.740±0.362、0.964±0.387)、对照组(0.319±0.077、0.310±0.141)(P<0.05)。(5)与雷帕霉素组和对照组比较，模型组注射CCl4第6、28天P53表达升高，LC3B表达降低，且P53与LC3B共定位增加。结论 CCl4诱导的急性肝损伤、肝纤维化大鼠肝细胞P53自噬水平下降；雷帕霉素通过激活肝细胞P53选择性自噬减轻急性肝损伤、肝纤维化程度。

• 单位
  河南省人民医院; 郑州大学