分枝杆菌分型三重PCR检测方法的建立及应用

作者：娄忠子; 刘聪暖; 贾万忠; 周继章; 闫鸿斌; 曹小安; 李立; 李兆才; 付宝权

来源：中国畜牧兽医, 2016, 43(01): 8-15.

DOI：10.16431/j.cnki.1671-7236.2016.01.002

• 分枝杆菌
• 结核分枝杆菌
• 牛分枝杆菌
• 三重PCR
• 初步鉴定

本研究旨在建立一种快速鉴定分枝杆菌的三重PCR方法,并比较分析其在临床检测中的可靠性。根据已发表的结核分枝杆菌、牛分枝杆菌和非洲分枝杆菌rv3036c基因,结核分枝杆菌rv1970f基因(RD7)和牛分枝杆菌pncA基因的序列,改造并设计合成了3对特异性扩增引物,建立了一种能对分枝杆菌样品进行初步鉴定的三重PCR方法。结果显示该方法可针对rv3036c、rv1970f和pncA基因分别扩增出大小为500、125和249bp的目的片段,能特异性检测出结核分枝杆菌(500和125bp两条带)和牛分枝杆菌(500和249bp两条带),并可将结核分枝杆菌、牛分枝杆菌与其他分枝杆菌加以区分。本方法的检测灵敏度为50pg/μL模板基因组DNA。对86株抗酸染色阳性菌进行三重PCR鉴定,鉴定结果与细菌16SrDNA和ITS序列测定结果一致,检测准确度为100%,优于生长特征和生化试验鉴定。

• 单位
  农业部; 家畜疫病病原生物学国家重点实验室; 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心; 中国农业科学院兰州兽医研究所