ADIPOQ shRNA在猪前体脂肪细胞中转染体系的优化

作者：李付娟; 王帅; 朱亚楠; 任久生; 柳思源; 徐靖博; 张阳阳; 孙广杰; 高妍; 张嘉保; 陈承祯

来源：中国兽医学报, 2013, (04): 616-621+626.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2013.04.022

• ADIPOQ基因
• shRNA
• 真核表达载体
• RNAi
• 前体脂肪细胞 ADIPOQ gene
• shRNA
• eukaryotic expression vector
• RNA interference
• preadipocytes

根据Genbank提供的猪ADIPOQ基因序列及shRNA设计原则,化学合成4段编码短发夹RNA的寡核苷酸序列,将其定向克隆到pGPU6/GFP/Neo中U6启动子的下游,转化DH5α菌株,双酶切鉴定正确后进行测序,将构建好的真核表达载体转染前体脂肪细胞,并对条件进行优化。限制性内切酶PstⅠ和BamHⅠ酶切显示设计合成的shRNA编码序列被成功插入pGPU6/GFP/Neo质粒中,测序结果显示插入片断与设计序列完全一致,证明重组质粒构建成功,转入到前体脂肪细胞中,可以看见绿色荧光蛋白表达。当质粒浓度0.6μg,脂质体2000是1.2μL,两者质量/体积比为l∶2时,此时转染效率最高,达到53...

• 单位
  吉林大学