摘要
目的 研究肺岩宁抑制人肺腺癌A549细胞侵袭转移的分子机制。方法 体外培养A549细胞,细胞计数试剂盒(Cell counting kit 8,CCK-8)检测不同浓度的肺岩宁对A549细胞生长增殖的影响;细胞形态学观察和免疫印迹实验(Western blot)检测转化生长因子β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)对A549细胞上皮间质转化(Epithelial mesenchymal transformation,EMT)发生的影响;Western blot、实时荧光定量聚合酶链式反应(Real time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)实验检测TGF-β1诱导前后,肺岩宁对A549细胞EMT标志蛋白及mRNA表达变化;划痕实验、Transwell实验检测TGF-β1诱导前后,肺岩宁对A549细胞侵袭和迁移能力的影响变化;构建稳定过表达Snail的A549细胞株,Western blot、RT-qPCR实验检测稳定过表达锌指转录因子(Snail)后,肺岩宁对A549细胞EMT标志蛋白及mRNA表达变化;划痕实验、Transwell实验检测稳定过表达Snail后,肺岩宁对A549细胞侵袭和迁移能力的影响变化。结果 不同浓度的肺岩宁处理后,A549细胞的生长受到不同程度的抑制(P<0.01);10 ng·mL-1的TGF-β1可以诱导A549细胞EMT发生;与对照组比较,TGF-β1诱导后,A549细胞侵袭迁移能力增加(P<0.01),而与TGF-β1组比较,肺岩宁能够抑制A549细胞的侵袭迁移能力(P<0.01)、上调A549细胞中E钙黏蛋白(E-cadherin)及Ecadherin mRNA的表达(P<0.01),下调N钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和Snail及其mRNA的表达(P<0.05),抑制A549细胞EMT发生;与TGF-β1诱导组比较,稳定过表达Snail能够减弱肺岩宁对A549细胞的侵袭转移能力的抑制作用(P<0.01)、减弱肺岩宁对A549细胞中E-cadherin及其mRNA表达的上调作用(P<0.01)、N-cadherin、Snail(P<0.01)Vimentin(P>0.05)和及其mRNA表达的下调作用。结论 肺岩宁方可能通过下调转录因子Snail的表达抑制A549细胞EMT发生及其侵袭转移。
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单位上海中医药大学附属龙华医院