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摘要
目的探讨染铅星形胶质细胞条件培养液(ACM)对神经元突触形成影响,为揭示铅神经毒性的机制提供参考数据。方法星形胶质细胞在含50、100、200、400和800μmol/L醋酸铅的培养液中培养72 h后,AlamarBlue法测细胞活力并收集ACM。将原代培养的神经元分成纯培养组、非谷氨酸诱导的ACM处理组、谷氨酸诱导无染铅ACM处理组和谷氨酸诱导的50、100和200μmol/L染铅ACM处理组,分别在培养的24、48和72h后,收集神经元,用蛋白质印迹法(Westernblot)法检测神经元内突触素蛋白含量,采用免疫荧光法测定培养72 h后神经元内SYP的表达。结果各染铅组的细胞活力随染铅浓度的升高而明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。Westernblot法检测分析结果显示,与纯培养组比较,各时段的非谷氨酸诱导的ACM处理组和谷氨酸诱导无染铅ACM处理组的神经元内突触素蛋白含量明显增加,差异有统计学意义(P<0.01),与非谷氨酸诱导的ACM处理组比较,谷氨酸诱导的ACM处理组神经元内突触素蛋白表达显著减少,差异有统计学意义(P<0.05),与谷氨酸诱导无染铅ACM处理组比较,培养72 h的各铅暴露的ACM处理组的神经元内突触素蛋白含量随染铅剂量升高而明显降低,差异有统计学意义(P<0.01),培养48 h的200μmol/L染铅ACM处理组的神经元内突触素蛋白含量明显降低,差异有统计学意义(P<0.01),培养24 h的各染铅的ACM处理组的神经元内突触素蛋白含量未见明显改变。突触素免疫荧光双标染色结果显示,培养72 h的各染铅的ACM处理组的神经元内突触素荧光颗粒数明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论星形胶质细胞对神经元的突触形成具有促进作用,染铅可抑制星形胶质细胞对突触形成的促进作用。
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