双重荧光RT-PCR检测4种致病性亚型埃博拉病毒方法的建立

作者：钟玉清; 郑夔; 苏锦坤; 方盛藩; 李小波; 师永霞; 黄吉城

来源：华南预防医学, 2014, 40(05): 416-420.

DOI：10.13217/j.scjpm.2014.0416

• 埃博拉病毒
• 聚合酶链反应

目的建立可同时检测苏丹、扎伊尔、本迪布焦和科特迪瓦4种致病性亚型埃博拉病毒的双重荧光RT-PCR检测方法。方法根据4种致病性亚型埃博拉病毒的核蛋白NP基因保守序列,针对苏丹型/扎伊尔型病毒以及针对本迪布焦型/科特迪瓦型病毒,相应设计2套引物和探针。以体外转录的4种亚型埃博拉病毒RNA为模板,进行条件的优化以及方法特异性、灵敏度、重复性试验,建立双重荧光RT-PCR检测方法。结果新建立的双重荧光RT-PCR方法检测只对4种埃博拉病毒阳性对照RNA模板有特异性扩增,与肾综合征出血热病毒、登革病毒、黄热病毒、西尼罗病毒、日本脑炎病毒、基孔肯雅病毒均无交叉反应,2套引物和探针的检测灵敏度均可达到最低50拷贝/μL。苏丹型和本迪布焦型埃博拉病毒阳性对照RNA模板的4种稀释度(2×108、2×106、2×104、2×102拷贝/μL)重复检测3次均有较好的重复性。结论建立的方法能同时检测上述4种亚型埃博拉病毒,灵敏度高,特异性强,可用于埃博拉病毒疑似病例的检测。

• 单位
  广东检验检疫技术中心