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摘要
目的探究纤溶酶原激活物抑制因子1(PAI-1)在腹膜透析患者中的表达及其功能。方法通过免疫组化和Wes-tern blot检测30例腹膜透析患者和30例终末期肾病患者腹膜组织中PAI-1的表达水平。将人腹膜间皮细胞(HPMCs)分为3组:正常对照组、TGF-β1+si-NC组和TGF-β1+si-PAI-1组。TGF-β1+si-NC组和TGF-β1+si-PAI-1组细胞用10 ng/ml TGF-β1培养24 h,并分别转染靶向PAI-1的siRNA(si-PAI-1)和阴性对照(si-NC)。通过Western blot检测腹膜间皮细胞中PAI-1、p-STAT3、STAT3、p-Smad3、Smad3、CollagenⅠ、E-cadherin、α-SMA、EGFR、p-EGFR和Acetylα-tubulin的蛋白表达。对C57/BL6小鼠连续28 d腹腔注射3 ml含4.25%葡萄糖的腹膜透析液来建立腹膜纤维化(PF)模型。将小鼠随机分为3组,每组12只:正常对照组、PF+si-NC组和PF+si-PAI-1组。PF+si-NC组和PF+si-PAI-1组小鼠分别腹腔注射300μl si-NC或si-PAI-1(0.1 mg/kg)。通过免疫组织化学染色检测小鼠腹膜组织中PAI-1、CollagenⅠ和α-SMA的阳性表达。结果与终末期肾病组比较,腹膜透析组患者腹膜组织中的PAI-1表达水平显著升高(P<0.05)。与正常对照组比较,TGF-β1+si-NC组腹膜间皮细胞中PAI-1、CollagenⅠ、α-SMA、p-Smad3、p-EGFR和p-STAT3蛋白相对表达量显著升高(P<0.05),E-cadherin、Acetylα-tubulin显著降低(P<0.05)。与TGF-β1+si-NC组比较,TGF-β1+si-PAI-1组腹膜间皮细胞中PAI-1、CollagenⅠ、α-SMA、p-Smad3、p-EGFR和p-STAT3蛋白相对表达量显著降低(P<0.05),E-cadherin、Acetylα-tubulin显著升高(P<0.05)。与正常对照组比较,PE+si-NC组腹膜组织中E-cadherin阳性率显著降低,α-SMA显著增加(P<0.05)。与PE+si-NC组比较,PE+si-PAI-1组腹膜组织中E-cadherin阳性率显著增加,α-SMA显著降低(P<0.05)。结论本研究证明了下调PAI-1可抑制腹膜纤维化的发展,推测这种抗纤维化机制可能与TGF-β1/Smad3和EGFR/STAT3信号通路的失活有关。
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