含信号肽的Mtb8.4/hIL12嵌合基因真核表达质粒的构建及在COS-7细胞中的表达

作者：李榕; 李晖; 钟森; 任红

来源：现代预防医学, 2007, (17): 3227-3230.

• 结核病
• MS
• hIL-12
• 嵌合基因

[目的]克隆结核分枝杆菌含信号肽的Mtb8.4(MS)/hIL12嵌合基因,导入真核表达载体pCI-neo,并在COS-7细胞中进行表达。[方法]首先以pcDNA3.1(+)-含信号肽的Mtb8.4(pMS)为模板,经聚合酶链反应(PCR)扩增出MS-linker基因,与pCI-neo载体进行连接重组,构建成pCI-neo-MS-linker(pMSL)重组质粒,然后以pORF-hIL12质粒为模板,经PCR扩增出hIL-12基因,将hIL-12基因与pMSL质粒进行连接重组,构建成MS/hIL12嵌合基因真核表达质粒,用限制性内切酶消化、PCR及DNA序列测定等多种分子生物学方法进行鉴定;重组嵌合质粒转染COS-7细胞后,用RT-PCR方法鉴定MS/hIL12嵌合基因在转录水平的表达情况。[结果]MS/hIL12嵌合基因重组真核表达质粒经证实构建成功;转染COS-7细胞后,MS/hIL12嵌合基因在转录水平成功表达。[结论]MS/hIL12嵌合基因重组真核表达质粒的成功构建及在COS-7细胞中的成功表达,为进一步研究其免疫保护效果及制备结核病MS/hIL12嵌合基因疫苗奠定了基础。

• 单位
  第二临床学院; 军事医学科学院; 南昌市血站; 成都中医药大学附属医院; 重庆医科大学