POLQ表达降低对SACC-83细胞DNA损伤敏感性的影响

作者：白晗; 刘涵; 朱蕾; 刘超; 李楠; 肖晶^*

来源：上海口腔医学, 2023, 32(02): 120-125.

DOI：10.19439/j.sjos.2023.02.002

• 唾液腺腺样囊性癌
• POLQ
• DNA修复
• 依托泊苷

目的 ：探讨DNA损伤环境中抑制POLQ对唾液腺腺样囊性癌（salivary adenoid cystic carcinoma,SACC）细胞SACC-83增殖及克隆形成能力、细胞周期及DNA损伤修复通路的影响。方法：应用shRNA(short hairpin RNA)瞬时转染方法构建POLQ敲减的SACC-83细胞模型，利用qRT-PCR及Western免疫印迹实验检测POLQ干扰效率。应用不同浓度DNA损伤剂依托泊苷（etoposide,ETP/VP-16-213）诱导SACC-83细胞发生DNA损伤，利用Western免疫印迹实验检测γH2AX的表达水平，评价DNA双链断裂水平。在不同浓度依托泊苷诱导形成的DNA损伤环境中，通过CCK-8细胞增殖实验检测抑制POLQ对SACC-83细胞增殖能力的影响。采用平板克隆实验观察抑制POLQ对SACC-83细胞克隆形成能力的影响，应用流式细胞仪分析抑制POLQ对SACC-83细胞周期的影响，应用Western免疫印迹实验检测抑制POLQ对SACC-83细胞γH2AX、RAD51及PARP1表达水平的影响。采用SPSS 20.0软件包对数据进行统计学分析。结果：应用shRNA瞬时转染方法抑制SACC-83细胞POLQ mRNA及蛋白的表达。依托泊苷以剂量依赖的方式促进SACC-83细胞γH2AX表达。POLQ表达降低可抑制SACC-83细胞增殖能力（P<0.001），且抑制作用随ETP浓度增加而减小。在依托泊苷诱导形成的DNA损伤环境中，POLQ表达降低可抑制SACC-83细胞克隆形成能力（P<0.001），诱导细胞发生S期阻滞（P<0.01）。POLQ通过促进γH2AX(P<0.05)及同源重组（homologous recombination,HR）通路相关蛋白RAD51(P<0.05)、抑制非同源末端连接（alternative non-homologous end joining,altNHEJ）通路相关蛋白PARP1(P<0.01)，调节DNA损伤修复。结论：POLQ表达降低，会促进SACC-83细胞对DNA损伤的敏感性。

• 单位
  大连医科大学