LCN2基因启动子区荧光素酶报告基因载体的构建及鉴定

作者：崔丽艳; 杨硕; 张捷

来源：中国误诊学杂志, 2011, 11(21): 5045-5047.

• 急相蛋白质类/遗传学
• 原癌基因蛋白质类/遗传学
• 肾/损伤

目的为进一步研究LCN2(Lipocalin 2)基因在急性肾损伤中的作用,克隆LCN2的编码序列,构建含LCN2基因的荧光素酶报告基因载体,并在肾小管上皮细胞系HK-2中表达。方法以HK-2细胞系提取的RNA为模板进行反转录-聚合酶链反应(RT-PCR),扩增产物用HindⅢ和SmaI双酶切后克隆到双荧光素酶报告基因载体PGL3-Basic中,用非脂质体法将构建质粒PGL3-Basic/LCN2导入HK-2中,氨苄青霉素选择培养,经双荧光素酶鉴定其表达。结果PCR和测序结果表明扩增的LCN2启动子序列正确,酶切检测证实重组荧光素酶报告基因载体构建成功。转染PGL3-Basic/LCN2质粒的HK-2细胞荧光素酶活性比转染空载体的明显增加(P<0.000 1)。结论成功克隆了LCN2的编码序列,构建了其荧光素酶报告基因载体PGL3-Basic/LCN2,有助于进一步研究LCN2基因在急性肾损伤中的作用机制。

• 单位
  北京大学第三医院