猪TLR3胞外区片段重组载体的构建、表达和多克隆抗体的制备

作者：管齐赛; 房永祥; 贾怀杰; 何小兵; 周涛; 杨孝朴; 景志忠

来源：甘肃农业大学学报, 2012, (03): 1-6+12.

DOI：10.13432/j.cnki.jgsau.2012.03.027

• 猪TLR3
• 胞外区
• 原核表达
• 多克隆抗体 poTLR3
• extracellular domain
• prokaryotic expression
• polyclonal antibody

为制备猪TLR3(poTLR3)胞外区蛋白的多克隆抗体,从poTLR3克隆载体扩增胞外区基因序列连接到pGEX-4T-1载体上,转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG的诱导下,表达GST-poTLR3融合蛋白,将表达的融合蛋白纯化,免疫家兔制备抗体,并以间接ELISA法测定抗体效价,利用Western-blot和细胞免疫荧光验证抗体与真核表达蛋结合的白特异性.结果表明:制备的多克隆抗体的效价可达1∶128 000,poTLR3胞外区蛋白在大肠杆菌中得到高效表达,并且制备的多克隆抗体特异性好、滴度高.

• 单位
  家畜疫病病原生物学国家重点实验室; 农业部; 甘肃农业大学; 中国农业科学院兰州兽医研究所