桑黄子实体多糖的提取及其对D-半乳糖诱导的3T3细胞损伤的保护作用

作者：胡晓彤; 叶玉洁; 石光; **晰; 谷明柳; 闫宇宁; 周嘉宁; 安丽萍^*

来源：食品科学, 2020, 41(19): 204-211.

• 桑黄子实体
• 多糖
• 抗氧化
• 细胞损伤

为优化桑黄子实体多糖提取工艺,探讨其体外抗氧化活性及其对D-半乳糖(D-galactose,D-gal)诱导的小鼠胚胎成纤维3T3细胞损伤的保护作用,本实验采用水提醇沉法,通过单因素-正交试验优化提取工艺,并经琼脂糖凝胶层析柱纯化,通过噻唑蓝法及β-半乳糖苷酶(senescence-associated-β-galactose,SA-β-gal)染色法观察桑黄子实体多糖对D-gal诱导的3T3细胞损伤模型的作用,测定桑黄子实体多糖对细胞上清液中活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平、丙二醛(malondialdehyde,MDA)浓度、过氧化氢酶(catalase,CAT)活力的影响。逆转录聚合酶链式反应法检测桑黄多糖对衰老细胞中转录因子E2相关因子2(transcription factor E2-related factor 2,Nrf2)-抗氧化反应元件(antioxidant response elements,ARE)信号通路中相关基因mRNA表达水平。结果表明:提取温度80℃、提取时间3 h、料液比1∶40(m/V)、提取次数4次,平均多糖提取率为6.64%;纯化处理后多糖质量分数为76.28%;桑黄子实体多糖对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼自由基清除率为77.14%,对超氧阴离子自由基清除率为31.22%,对羟自由基清除率为56.86%,具有抗氧化活性;噻唑蓝法结果显示,与模型组相比,桑黄子实体多糖质量浓度达到100μg/mL时细胞存活率极显著增加(P<0.01);SA-β-gal染色法结果显示桑黄子实体多糖可显著提高模型组细胞存活率(P<0.05),对D-gal诱导的3T3细胞细损伤具有保护作用;与模型组相比,桑黄子实体多糖组显著降低3T3细胞外液中ROS水平(P<0.05)、极显著降低MDA浓度(P<0.01)、显著提高CAT活力(P<0.05);与模型组相比,桑黄子实体多糖组中Nrf2通路及其3个下游基因(GCLC、NQO1和GCLM)的mRNA表达显著升高(P<0.05)。结论:桑黄子实体多糖提取方法稳定可靠,获得的桑黄子实体多糖具有一定的抗氧化活性,能提高细胞的增殖活性,对D-gal诱导的3T3细胞细损伤具有保护作用,桑黄子实体多糖的抗氧化机制可能由Nrf2通路介导,提高GCLC、NQO1、GCLM的mRNA表达而实现。

• 单位
  北华大学