奶牛源无乳链球菌enolase重组蛋白制备及其免疫保护性研究

作者：曾严; 张保海; 芦彪; 韩光丽; 张洁如; 姚学萍^*; 王印; 杨泽晓; 罗燕; 曹随忠

来源：中国兽医科学, 2023, 53(07): 902-910.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2023.0116

• 奶牛乳房炎
• 无乳链球菌
• enolase蛋白
• 亚单位疫苗

奶牛乳房炎是奶牛养殖场常见疾病，为了有效预防奶牛乳房炎，降低药物残留，提高奶牛养殖的生产效益，为牛源无乳链球菌亚单位疫苗的制备提供一定的依据，本研究选取无乳链球菌免疫原性较好的enolase蛋白为靶标，克隆enolase基因、构建重组表达质粒。经过诱导、表达和纯化获得重组enolase蛋白。用纯化的蛋白加以佐剂对小鼠进行二次免疫，测定免疫后小鼠的血清抗体水平，评价enolase蛋白亚单位疫苗的免疫效果和安全性。最终，成功从无乳链球菌分离株MN686586中扩增出enolase基因，构建出重组表达质粒pET-32a-enolase，经IPTG体外诱导表达，获得分子质量大小为67 ku的重组蛋白。用enolase亚单位疫苗免疫小鼠，间接ELISA检测小鼠血清抗体水平显示，二免后第14天小鼠血清抗体水平效价达到1∶25 600，并且相对免疫保护率（RPS）为100%。结果表明，enolase亚单位疫苗能够刺激小鼠产生一定的免疫应答和产生特异性抗体，已初步制备出针对牛源无乳链球菌的亚单位疫苗。

• 单位
  四川农业大学