RNA干扰质粒pcDU6的构建及其应用

作者：蒋冬贵; 夏昆; 邬玲仟; 潘乾; 龙志高; 夏家辉

来源：湖南师范大学学报(医学版), 2007, 4(01): 1-5+14.

DOI：10.3969/j.issn.1673-016X.2007.01.001

• RNA干扰
• U6promoter
• pcDU6
• AFP RNAi
• U6promoter
• pcDU6
• AFP

目的:根据RNAi的原理自主构建一个真核表达的RNAi载体pcDU6。方法:从人的gDNA中克隆出U6promoter(-315～+1),将其与Bgl II和ApaI双酶切的pcDNA3.1(-)质粒大片段酶连,转化JM109大肠杆菌,抽取阳性质粒测序证实,与GFP转染HT1080细胞;干扰肝癌细胞的AFP基因了解干扰效果。结果:pcDU6成功构建转染带有干扰AFP基因表达的RNAi质粒使肝癌细胞的能明显抑制AFP基因的表达(P<0.01),转染质粒后Hep-3B细胞生长明显被抑制(P<0.01)。结论:pcDU6是一个有效的真核表达的RNAi干扰载体。

• 单位
  医学遗传学国家重点实验室; 中南大学