RNAi抑制DNA甲基转移酶1的表达对胃癌细胞p16基因的影响

作者：赵军; 朱磊; 赵国海

来源：中国临床药理学与治疗学, 2018, 23(04): 395-399.

• 胃癌
• DNA甲基转移酶
• RNA干扰
• 甲基化

目的:运用RNAi(RNA interference)抑制胃癌细胞株BGC-823中DNA甲基转移酶1(DNA methylation transferase 1,DNMT1)基因的表达,当DNMT1基因沉默后观察p16基因的表达情况。方法:以DNMT1的mRNA核苷酸序列,构建si RNA质粒1、2、3和阴性对照si RNA质粒b,胃癌细胞培养后经脂质体转染。对DNMT1基因行QPCR检测其mRNA表达水平及Western blot检测其蛋白表达水平,确认其表达下调后筛选出最佳干扰质粒。以同样的方法检测胃癌细胞最佳干扰组、阴性对照组和空白对照组的p16基因的表达情况,以确认抑制DNMT1基因表达后对胃癌细胞p16基因的影响。结果:RNAi可有效抑制胃癌细胞株BGC-823中DNMT1基因的表达。对转染后的胃癌细胞DNMT1基因检测mRNA及蛋白表达情况,结果显示,转染si RNA2的胃癌细胞中DNMT1的表达明显低于其他转染组、阴性对照组及空白对照组(P<0.05),由此筛选出最佳干扰质粒si RNA2。用同样的方法检测胃癌细胞最佳干扰组(siRNA2)、阴性对照组和空白对照组的p16基因表达情况。结果显示,最佳干扰组的mRNA(1.6727±0.2242)及蛋白(0.9227±0.0337)表达水平均高于阴性对照组(1.0025±0.0877)、(0.5440±0.0229)和空白对照组(0.4729±0.0940)、(0.4767±0.0774)(P<0.05)。结论:用RNAi可以抑制胃癌细胞DNMT1基因的表达从而使p16基因去甲基化,使p16基因恢复表达。

• 单位
  皖南医学院弋矶山医院