丹酚酸B介导AMPK活化加剧氧化应激诱导的甲状腺癌细胞凋亡和自噬

作者：王定珍; 陈元鸿; 金娜; 李嘉贤; 齐荣生

来源：西部医学, 2020, 32(09): 1272-1278.

• 丹酚酸B
• AMPK
• 氧化应激
• 甲状腺癌
• 凋亡
• 自噬

目的探讨丹酚酸B对氧化应激诱导的甲状腺癌细胞凋亡和自噬的影响。方法选择不同浓度的丹酚酸B处理甲状腺癌TPC-1和甲状腺滤泡上皮细胞Nthy-ori 3-1细胞,24 h后CCK8检测细胞存活率;选择无显著毒性的剂量(2.5、5、10μg/mL)进行后续实验,流式细胞术检测细胞内活性氧(ROS)水平和细胞凋亡;蛋白印迹法检测细胞内和线粒体内细胞色素C以及凋亡、自噬相关蛋白的表达水平;免疫荧光检测LC3的水平;此外,在细胞中加入腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)抑制剂Compound C (50 nM)后,将细胞随机分为对照组、丹酚酸B 10μg/mL组、Compound C组、Compound C+丹酚酸B 10μg/mL组,流式细胞术检测细胞内ROS水平和细胞凋亡;蛋白印迹法检测AMPK相关蛋白和自噬相关蛋白的表达。结果 TPC-1和Nthy-ori 3-1细胞的存活率以丹酚酸B浓度依赖的方式降低,丹酚酸B浓度超过20μg/mL时,TPC-1细胞的存活率显著降低(P<0.05);当丹酚酸B浓度超过40μg/mL时,Nthy-ori 3-1细胞的存活率显著降低(P<0.05)。与对照组相比,经5、10μg/mL丹酚酸B预处理后,TPC-1细胞内的ROS水平、凋亡率、Bax、Cleaved caspase 3、Beclin1和细胞质中Cyto C的蛋白表达水平、LC3的水平、AMPK磷酸化水平、LC3-II/LC3-I的比值均显著升高(P<0.05);Bcl-2、P62和线粒体中Cyto C的蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。与对照组相比,丹酚酸B 10μg/mL组AMPK磷酸化水平、LC3-II/LC3-I比值、ROS水平、细胞凋亡率均显著升高(P<0.05);Compound C组AMPK磷酸化水平,LC3-II/LC3-I比值、ROS水平、细胞凋亡率均显著降低(P<0.05)。与Compound C组比较,Compound C+丹酚酸B 10μg/mL组AMPK磷酸化水平、LC3-II/LC3-I的比值、ROS水平、细胞凋亡率均显著升高(P<0.05)。结论 5、 10μg/mL的丹酚酸B可通过介导的AMPK活化加剧氧化应激诱导的甲状腺癌细胞的凋亡和自噬,以10μg/mL的丹酚酸B效果最佳。

• 单位
  江南医院