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摘要
目的：肝癌是全球第6大常见的恶性肿瘤，肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)占所有肝癌患者的85%～90%。HCC具有起病隐匿、进展快、复发早、易耐药和预后差的临床特点。中心体相关激酶2(NIMA related kinase 2,NEK2)是细胞周期调控蛋白激酶，在有丝分裂中调节细胞周期。细胞衰老是一个复杂的异质过程，是一种稳定的细胞周期停滞形式，可限制细胞的增殖潜能。本研究旨在分析NEK2表达水平与肝癌细胞衰老的关系，探究NEK2对肝癌细胞衰老的影响及其分子机制。方法：从GenAge获得581个衰老相关基因，从癌症基因组图谱数据库下载370例HCC患者肿瘤组织的基因表达数据，利用R包分析NEK2与衰老相关基因的共表达情况。采用KEGG分析NEK2过表达的HEK293细胞差异基因的富集通路。在肝癌细胞SMMC-7721及HepG2中构建NEK2过表达及敲低的稳定转染细胞株，采用衰老相关的β-半乳糖苷酶染色检测衰老细胞，CCK-8法和克隆形成实验检测细胞增殖，流式细胞仪分析细胞周期，蛋白质印迹法检测p53/p21、p16/Rb和第10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN)/Akt信号转导通路相关蛋白质的表达情况。结果：与NEK2共表达的衰老相关基因有320个。KEGG分析显示细胞衰老信号通路在NEK2过表达的HEK293细胞中存在显著富集。与未敲低NEK2的SMMC-7721或HepG2相比，敲低NEK2的SMMC-7721和HepG2衰老细胞增加，细胞增殖和克隆形成明显减少，G0/G1期细胞的百分比增加，磷酸化的Akt(phospho-Akt,p-Akt)和磷酸化的Rb(phosphoRb,p-Rb)蛋白质表达水平明显降低，p16蛋白质表达水平明显升高(均P<0.05)；与转染空白质粒的SMMC-7721或HepG2相比，过表达NEK2的SMMC-7721和HepG2衰老细胞减少，细胞增殖和克隆形成明显增加，G0/G1期细胞的百分比减少，p-Akt和p-Rb蛋白质表达水平明显升高，p16蛋白质表达水平明显降低(均P<0.05)。结论：NEK2可能通过p16/Rb及PTEN/Akt信号转导通路介导肝癌细胞的抗衰老效应，为NEK2促进肝癌进展提供了新的实验依据，也为肝癌的靶向治疗提供了新思路。
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