宿主Rac1对柔嫩艾美耳球虫子孢子入侵DF-1细胞的影响

作者：刘展; 朱顺海; 赵其平; 黄兵; 韩红玉; 黄文浩; 姚亚文; 董辉

来源：复旦学报(自然科学版), 2021, 60(06): 759-767.

DOI：10.15943/j.cnki.fdxb-jns.20210421.002

• 球虫病
• 柔嫩艾美耳球虫
• Ras相关的C3肉毒素底物1
• NSC23766
• 体外入侵试验

Ras相关的C3肉毒素底物1(Rac1)是Rho家族的一种小分子GTP酶,本文研究了宿主Rac1对柔嫩艾美耳球虫子孢子入侵DF-1细胞的影响.克隆鸡Rac1基因并构建原核重组质粒pGEX-4T-1-Rac1,表达、纯化重组蛋白Rac1-GST,用Western blot对重组蛋白进行验证;使用qPCR、Western blot和间接免疫荧光分别对柔嫩艾美耳球虫子孢子感染后DF-1细胞中Rac1的mRNA转录水平、蛋白表达水平和分布变化进行了检测;并利用体外入侵试验检测了Rac1多克隆抗体及其抑制剂NSC23766处理DF-1细胞后对子孢子入侵的影响.结果显示:成功克隆了579 bp的Rac1基因,并获得47.5 kDa的重组Rac1-GST蛋白.qPCR结果显示,在柔嫩艾美耳球虫子孢子感染DF-1细胞60～72 h时,DF-1细胞中Rac1的转录水平显著升高,但Western blot结果显示,Rac1蛋白的表达水平在感染前后无明显差异.间接免疫荧光的结果显示,子孢子入侵DF-1细胞15～30 min时,Rac1的荧光强度在子孢子顶端增加.体外入侵试验结果显示,用Rac1多克隆抗体孵育DF-1细胞后对子孢子的入侵没有明显影响,而利用NSC23766抑制Rac1的内源性活性后能够显著降低子孢子的入侵效率,且抑制作用与抑制剂的使用浓度成正比.以上结果表明:宿主Rac1的内源性活性会影响柔嫩艾美耳球虫子孢子入侵DF-1细胞的效率,在子孢子的入侵过程中具有积极作用.

• 单位
  中国农业科学院上海兽医研究所; 农业部; 上海师范大学