基于绵羊肺炎支原体EF-Tu蛋白间接ELISA方法的建立

作者：张洁; 曹军军; 祝明松; 杨亚军; 王小凤; 王璐; 石峰^*

来源：动物医学进展, 2019, 40(11): 6-13.

DOI：10.16437/j.cnki.1007-5038.2019.11.002

• 绵羊肺炎支原体
• 原核表达
• EF-Tu蛋白
• Western blot
• 间接ELISA

为解决绵羊肺炎支原体感染的预防问题,建立一种简单、快速、成本低的诊断方法,构建绵羊肺炎支原体EF-Tu基因原核表达载体,诱导纯化重组蛋白并用Western blot分析其反应原性,以重组蛋白为诊断抗原,建立绵羊肺炎支原体间接ELISA检测方法,评估其特异性和灵敏性。结果表明,构建的重组蛋白纯化后,经Western blot证实具有良好的反应原性;间接ELISA反应条件优化显示,抗原稀释度为0.25μg/mL,一抗最佳稀释浓度为1∶50,最佳孵育时间为90 min,封闭液为50 g/L脱脂奶粉,二抗最佳稀释倍数为1∶8 000,最佳孵育时间为60 min,特异性与灵敏性良好;该方法与间接血凝法对100份血清进行检测,两者符合率为88.7%。说明试验建立的绵羊肺炎支原体间接ELISA检测方法可以推广使用。

• 单位
  石河子大学; 生命科学学院; 动物科技学院