响应面优化硝普钠法测定发酵液中的蛋氨酸含量

作者：胡翠英; 李良智; 姚雪梅; 王桃云; 顾华杰

来源：食品工业科技, 2019, 40(01): 256-261.

DOI：10.13386/j.issn1002-0306.2019.01.046

• 发酵液
• 蛋氨酸
• 硝普钠反应
• 紫外可见分光光度计
• 响应面法

为了优化硝普钠法(sodium nitroprusside method,SNP)测定发酵液中的蛋氨酸(Met)含量的实验条件,利用紫外可见分光光度计分析不同氨基酸中加入各SNP反应试剂、反应不同时间对反应液吸收峰的影响。在甘氨酸(Gly)添加量、NaOH加入量、SNP加入量、H3PO4加入量、各试剂加入后的反应时间等单因素实验的结果上,利用响应面法优化SNP法。结果表明:与SNP试剂反应后,除了组氨酸(His)外,其它氨基酸不会对Met的测定产生影响。反应试剂H3PO4的加入对513 nm处吸收峰的形成起决定性作用;发酵液中各成分SNP反应后,最大吸收峰无明显变化。利用单因素和响应面法优化SNP法,得出较佳测定方案:发酵液1500×g离心15 min; 5 m L上清液中加入0.74 m L 5 mol/L NaOH和0.15 m L 10%SNP溶液,摇匀试管,放置30 min;将2 m L H3PO4逐滴加到混合物中,振荡试管,反应5 min,在513 nm处测吸收值。当Met浓度为1.0 g/L时,最佳测定条件下吸收值为1.952。通过光谱分析确认Gly的加入会降低Met和His反应的吸收峰值,可通过分析最大吸收峰波长是否在513 nm处,判断样品中是否有组氨酸影响测定。实验获得的SNP法可用于迅速筛选蛋氨酸高产菌。

• 单位
  苏州科技大学