miR-499通过抑制calcineurin抑制缺血/再灌注心肌细胞的凋亡

作者：吴静; 聂祖琼; 尹琬凌^*

来源：山西医科大学学报, 2023, 54(07): 932-938.

DOI：10.13753/j.issn.1007-6611.2023.07.008

• miR-499
• 钙调磷酸酶
• 缺血/再灌注
• 凋亡
• 心肌细胞

目的 探讨miR-499对钙调磷酸酶(calcineurin, CaN)的调控作用以及在缺血/再灌注(ischemia/repefusion, I/R)损伤心肌细胞中的作用机制。方法 将大鼠心肌细胞H9c2分成6组：对照组、I/R组、I/R+mimics组(转染miR-499 mimics后构建I/R细胞模型)、I/R+NC组(转染miR-NC后构建I/R细胞模型)、I/R+mimics+CsA组(转染miR-499 mimics后加入CaN抑制剂CsA处理，最后构建I/R细胞模型)和I/R+NC+CsA组(转染miR-NC后加入CsA处理，最后构建I/R细胞模型)。CCK-8检测各组细胞增殖能力，Hochest33258染色观察各组细胞形态的变化，TUNEL检测各组细胞凋亡情况，qRT-PCR检测各组细胞中miR-499、CaN和凋亡相关(Bcl-2、Bax、Caspase-3)基因的表达，Western blot检测各组细胞中CaN和凋亡相关(Bcl-2、Bax、Caspase-3)蛋白的表达。结果 与对照组相比，I/R组细胞增殖能力显著降低(P<0.01),细胞致密浓染，呈亮蓝色，凋亡细胞增多，细胞中miR-499、Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.01),CaN、Bax和Caspase-3 mRNA和蛋白水平显著升高(P<0.01);与I/R+NC组相比，I/R+mimics组和I/R+NC+CsA组细胞增殖能力均显著升高(P<0.01),致密浓染的细胞核均有所减少，凋亡细胞减少，细胞中miR-499、Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.05),CaN、Bax和Caspase-3 mRNA和蛋白水平显著降低(P<0.05);与I/R+NC+CsA组相比，I/R+mimics+CsA组上述作用更加显著。结论 miR-499能够抑制CaN的表达，抑制I/R损伤心肌细胞的凋亡，减轻心肌细胞损伤。

• 单位
  武汉市中心医院; 华中科技大学同济医学院