猪细小、猪伪狂犬和猪繁殖与呼吸综合征病毒三重RT-qPCR检测方法的建立及初步应用

作者：刘斌; 赵翠青; 刘立明; 沙万里; 董文龙; 李国江^*

来源：吉林农业科技学院学报, 2022, 31(02): 1-25.

• 猪细小病毒
• 猪伪狂犬病毒
• 猪繁殖与呼吸综合征病毒
• 荧光定量PCR
• 检测方法

针对猪细小（PPV）、猪伪狂犬（PRV）和猪繁殖与呼吸综合征（PRRSV）病毒的保守区域设计用于构建荧光定量PCR体系的引物和探针。以构建的重组质粒标准品为模板建立三重荧光定量PCR体系，并对三重荧光定量PCR体系进行优化并进行特异性、灵敏性、重复性等试验。最后利用构建的三重荧光定量PCR体系和普通PCR体系分别检测病料以进行比较。结果表明：三种病毒在单重和三重荧光定量PCR体系中均无非特异性扩增；三种病毒在单重和三重荧光定量PCR体系中的灵敏度均可达到10 copies/μL；单重和三重荧光定量PCR体系组内和组间重复性变异系数均在5%以内；单重和三重荧光定量PCR在稀释度范围内呈现良好的线性关系。应用本研究构建的三重荧光定量PCR体系对164份临床组织样品进行检测，其中PPV阳性检出率为16.7%,PRV阳性检出率为10%,PRRSV阳性检出率为18.9%；普通PCR检测中PPV阳性检出率为6.5%,PRV阳性检出率为3.6%,PRRSV阳性检出率为7.5%。说明本研究建立的PPV、PRV和PRRSV三重荧光定量PCR检测方法符合临床检测要求并且比普通PCR方法更敏感、更特异。

• 单位
  动物科技学院; 吉林农业科技学院