摘要
目的 探讨miRNA146a通过TRAF6下调IFNβ的表达情况。方法 设计TRAF6基因3’UTR区miRNA146a结合位点的野生型引物,随后预测IRF-3及TRAF6基因3’UTR区域可能的miRNA结合位点,以人cDNA为模板,进行PCR目的片段扩增,将HeLa细胞在含10%胎牛血清的DMEM高糖培养液进行传代培养,并进行细胞RNA提取,逆转录,进行实时定量RT-PCR、免疫印迹实验。结果 miRNA146a、miRNA23a、miRNA24k可上调IRF-3启动子活性,通过表达miRNA146a转染细胞检测IFNβ通路上游分子TRAF6、IRAK1、NF-κB,提示miRNA146a、TRAF6、IRAK1、NF-κB均明显下降,表达miRNA146a降低pGL3c-TRAF6-3UTR萤光素酶活性,干扰miRNA146a可上调萤光素酶活性,miRNA146a下调TRAF6表达,TRAF6 siRNA下调PolyI:C激活的IFNβ启动子活性,TRAF6 siRNA较对照能够显著增加miRNA146a对IFNβ启动子下调作用。结论 IRF-3及IFNβ可能是EB病毒诱导宿主miRNA的调控靶点,为防治EB病毒相关疾病提供新的思路。
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单位南京医科大学第一附属医院