蛋白激酶C活化对兔视网膜色素上皮细胞抗氧化能力的影响及机制研究

作者：卫冬; 陈丽娟; 教莹莹; 李红玉; 孙兆义^*

来源：中国当代医药, 2018, 25(33): 16-20.

• 视网膜色素上皮细胞
• 蛋白激酶C
• 核因子E2相关因子2
• 谷胱甘肽

目的通过激活兔视网膜色素上皮细胞(RPE)内蛋白激酶C(PKC),观察RPE细胞核内转录因子E2相关因子2(Nrf2)的表达情况以及细胞内谷胱甘肽(GSH)的表达水平。方法应用免疫荧光染色鉴定原代培养兔视网膜色素上皮细胞(RPE),将第3代RPE细胞分为空白对照组(15%胎牛血清的DMEM培养液,n=8)、PMA组(15%胎牛血清的DMEM培养液+4μl 100 nmol/L PKC特异激活剂佛波酯溶液,n=8)和PMA+BST组(用4μl 10μmol/L Nrf2抑制剂鸦胆苦醇溶液预处理RPE细胞1 h后,吸出并加入含PMA 4μl 100 nmol/L的15%胎牛血清的DMEM培养液,n=8),培养24 h后,采用Western-blot方法检测Nrf2蛋白在胞质和胞核内的表达,采用GSH试剂盒检测各组RPE细胞内GSH的表达,对细胞核内Nrf2及细胞内GSH表达进行相关性分析,采用免疫荧光染色检测Nrf2蛋白在细胞内转位情况。结果 RPE细胞胞质内可见黑色素颗粒,呈长梭形,鼠抗人角蛋白(AE1/AE3)免疫荧光染色鉴定呈强阳性;Western blot检测结果显示,与对照组比较,PMA组和PMA+BST组胞质内Nrf2蛋白表达显著减少,胞核内Nrf2蛋白表达显著增加,其中PMA组胞质内Nrf2蛋白表达较PMA+BST组显著降低,而细胞核内Nrf2蛋白表达则显著增多(胞质:F=26.62,P<0.05;胞核:F=29.88,P<0.05)。GSH检测试剂盒检测显示,与对照组比较,PMA组和PMA+BST组细胞内GSH表达显著增高,其中PMA组细胞内GSH表达显著高于PMA+BST组(F=37.64,P<0.05)。细胞核内Nrf2与细胞内GSH表达成正相关(R2=0.908,P<0.05)。免疫荧光染色结果显示,与对照组相比,PMA组和PMA+BST组细胞核内Nrf2蛋白表达增加,发生了核转位,其中PMA组较PMA+BST组核转位更为显著。结论 PKC活化能够促进RPE细胞抗氧化能力,其作用机制与PKC/Nrf2信号通路调节有关。

• 单位
  牡丹江医学院附属红旗医院