scFv亲和力对CAR-T细胞抗肿瘤能力的影响

作者：张代群; 李峰; 王淑敏; 张凯; 石晓娟; 张毅^*

来源：中国免疫学杂志, 2020, 36(09): 1044-1057.

• 单链可变区(scFv)
• ErbB2
• 亲和力
• 嵌合抗原受体T细胞
• 细胞杀伤

目的:比较抗原亲和力不同的scFv片段对CAR-T细胞增殖、分化和抗肿瘤能力的影响。方法:分别构建靶向ErbB2的FRP5(KD=30 nmol/L)和chA21(KD=11 nmol/L)CAR慢病毒表达载体,包装病毒后制备CD8+CAR-T细胞;在CAR-T细胞扩增过程中,通过计数细胞来检测细胞增殖;利用流式细胞术检测CAR-T细胞分化情况;利用荧光素酶活性法检测杀伤活性;用ELISA检测CAR-T细胞在肿瘤识别过程中IL-2和IFN-γ的分泌情况;利用成像流式细胞仪检测scFv亲和力对CAR-T细胞形成免疫突触能力的影响。结果:成功构建了CD8+ CAR-T细胞,FRP5和chA21 CAR阳性率均达50%左右;CAR-T细胞的增殖和分化状态没有差异;荧光素酶活性法显示chA21-CAR-T细胞裂解肿瘤细胞的能力较强;ELISA检测结果显示chA21-CAR-T细胞分泌细胞因子能力更强;chA21-CAR-T细胞形成免疫突触的能力更强。结论:包含高亲和力scFv的chA21-CAR-T细胞具有较强的抗原依赖性杀伤活性。

• 单位
  生命科学学院; 郑州大学第一附属医院; 郑州大学