表皮结构基因AaCPR100A对埃及伊蚊卵表皮结构形成和脂肪酸延伸酶作用的影响

作者：陈静; 廖承红; 韩谦

来源：2021中国畜牧兽医学会兽医寄生虫学分会第二届青年科学家学术论坛, 中国上海, 2021-10-16.

DOI：10.26914/c.cnkihy.2021.080686

• 埃及伊蚊
• AaCPR100A
• RNA干扰
• 蚊卵
• 表皮结构
• 脂肪酸延伸酶ELO7

[目的]显微注射dsRNA干扰埃及伊蚊表皮结构基因AaCPR100A,分析蚊卵表皮结构的变化,利用RNA-seq数据分析并筛选干扰后差异显著基因,并通过RNA干扰技术验证其生物学功能。[方法]选取羽化3～5天的雌性成蚊,显微注射dsRNA进行干扰,干扰后12h进行血餐,血餐72h后,分别以一只蚊虫为单位,10只为一组进行产卵,实验重复三次,基于扫描电镜技术分析孵化异常的蚊卵表皮结构。采用RNA-seq分析并筛选表型异常的蚊卵中的显著差异基因,RNA干扰进一步验证其生物功能。[结果]通过显微注射dsRNA的方式干扰成蚊AaCPR100A基因后,AaCPR100A基因的转录丰度下调,实验组存活率显著降低,约为30%,饱血率、产卵率及卵的大小未出现显著性差异,而孵化率显著降低,为5%。光学显微镜图像显示,当AaCPR100A基因被干扰后,成蚊所产蚊卵较对照组表面光滑,外绒毛膜区域(OCT)形成异常。利用扫描电镜观察蚊卵超微结构,进一步证明,AaCPR100A基因受干扰后,明显影响蚊卵外绒毛膜的形成,其中央结节(CT)相互聚拢,周边结节(PT)和外绒毛膜网络结构消失。经RNA-seq结果分析,该蚊卵的AaCPR100A基因表达水平降低后,脂肪酸延伸酶ELO7基因表达显著上调。RNA干扰基因ELO7,目的基因显著下调,与对照组相比,约有20%的蚊虫所产的卵出现发育异常现象,未能完成正常孵化。[结论]AaCPR100A基因影响蚊卵表皮结构的形成,同时可影响脂肪酸延伸酶的表达,进而影响蚊卵的正常孵化。

• 单位
  生命科学学院; 海南大学