过表达CHIP对缺氧/复氧诱导下RIPK3介导神经细胞程序性死亡的影响

作者：严澎; 李文波; 李元辉; 王玮; 高玉霞

来源：卒中与神经疾病, 2021, 28(05): 494-498.

• 神经细胞损伤
• 热休克蛋白70羧基末端相互作用蛋白
• 受体相互作用蛋白激酶3
• 氧化应激
• 炎症反应
• 程序性坏死

目的探讨热休克蛋白70羧基末端相互作用蛋白(Carboxylterminus of Hsp70 interacting protein, CHIP)过表达对缺氧(Hypoxia, H)/复氧(Reoxygenation, R)诱导下受体相互作用蛋白激酶3(Receptor-interacting protein kinase 3,RIPK3)介导的神经细胞程序性死亡的影响。方法将体外培养的小鼠脑神经瘤(Mouse neuroblastoma N2a cells, Neuro-2a)细胞分为正常组(正常培养)、H/R组(构建H/R模型)、H/R+空载体组(转染pcDNA3.1空载体质粒后构建H/R模型)和H/R+CHIP过表达组(转染pcDNA3.1-CHIP过表达质粒后构建H/R模型);采用实时荧光量PCR(Real-time fluorescence quantitative PCR,qPCR)检测细胞中CHIP mRNA相对表达水平;免疫印迹法(Western blotting)检测细胞中CHIP,RIPK3和混合系列蛋白激酶样结构域(Mixed lineage kinase domain-like protein, MLKL)蛋白相对表达水平;细胞计数试剂盒-8(Cell counting kit-8,CCK-8)法检测细胞存活率;试剂盒检测细胞乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase, LDH)漏出量和白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase, SOD)、丙二醛(Malondialdehyde, MDA)水平;2,7-二氯二氢荧光素二乙酸酯(2,7-Dichlorodi hydrofluorescein diacetate, DCFH-DA)法检测活性氧(Reactive oxygen species, ROS)水平。结果与正常组比较,H/R组细胞中CHIP mRNA,CHIP蛋白表达水平和细胞存活率以及SOD水平均明显降低,而LDH漏出量和RIPK3,MLKL蛋白表达以及IL-6,TNF-α,ROS,MDA水平均明显升高(P<0.05);与H/R组比较,H/R+空载体组中上述各指标水平均无明显变化(P>0.05);与H/R+空载体组比较,H/R+CHIP过表达组细胞中CHIP mRNA,CHIP蛋白表达水平和细胞存活率以及SOD水平均明显升高,而LDH漏出量和RIPK3,MLKL蛋白表达以及IL-6,TNF-α,ROS,MDA水平均明显降低(P<0.05)。结论 CHIP过表达可通过抑制RIPK3介导的神经细胞程序性坏死来减轻H/R诱导的神经细胞损伤。

• 单位
  郑州大学; 神经内科