猪星状病毒nsP1a/4蛋白原核表达及其多克隆抗体的制备

作者：刘燚; 董覃婷; 朱鑫玥; 张广欣; 吴奥祺; 陈樱; 欧阳康; 韦祖樟; 黄伟坚^*

来源：黑龙江畜牧兽医, 2022, (21): 75-79.

DOI：10.13881/j.cnki.hljxmsy.2022.02.0077

• 猪星状病毒
• 非结构蛋白
• nsP1a/4基因
• 原核表达
• 多克隆抗体

为了获得猪星状病毒(Porcine astrovirus, PAstV)重组蛋白nsP1a/4和多克隆抗体nsP1a/4,试验采用PCR技术扩增得到nsP1a/4基因片段，通过双酶切技术鉴定重组表达质粒nsP1a/4-pET-32a。利用大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞表达重组蛋白nsP1a/4,通过SDS-PAGE鉴定重组蛋白nsP1a/4表达情况及可溶性。利用Ni-Agarose Resin纯化重组蛋白nsP1a/4,再通过Western-bolt验证。以纯化的重组蛋白nsP1a/4免疫健康新西兰大白兔制备多克隆抗体nsP1a/4,通过Western-bolt检验多克隆抗体nsP1a/4的特异性。结果表明：试验扩增出nsP1a/4基因片段，成功构建出重组表达质粒nsP1a/4-pET-32a,重组蛋白nsP1a/4以包涵体形式在大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中大量表达。经Ni-Agarose Resin纯化的重组蛋白nsP1a/4单一，Western-bolt成功鉴定到重组蛋白nsP1a/4,多克隆抗体nsP1a/4能与重组蛋白nsP1a/4发生特异性结合。说明试验成功制备出PAstV的多克隆抗体nsP1a-4。

• 单位
  广西大学