基于酵母双杂交系统筛选灰飞虱体内与大麦黄条点花叶病毒核衣壳蛋白互作的蛋白质

作者：俎瑶琛; 刘文文; 刘艳^*; 王锡锋

来源：植物病理学报, 2019, 49(02): 226-234.

DOI：10.13926/j.cnki.apps.000361

• 灰飞虱
• 大麦黄条点花叶病毒
• 酵母双杂交
• cDNA文库
• 互作蛋白

为了获取影响大麦黄条点花叶病毒(BYSMV)在灰飞虱体内增殖、积累和传播的相关介体因子,本研究利用分离泛素酵母双杂交膜系统,以BYSMV核衣壳蛋白(N)为诱饵对灰飞虱c DNA文库进行了筛选。将BYSMV N基因构建到诱饵载体p DHB1上进行表达检测和功能验证,结果表明重组载体p DHB1-N能在酵母内正常表达并行使功能。利用诱饵载体筛选p PR3-N空文库对文库筛选条件进行优化,确定3-氨基-1,2,4-三唑(3-AT)浓度为12 mmol·L-1的QDO平板为筛选文库培养基条件,去除可能存在的轻微筛库背景。在此筛选条件下以诱饵载体从灰飞虱c DNA文库中筛选得到57个阳性克隆,序列比对结果表明这些阳性克隆编码17种候选蛋白,包括表皮蛋白、泛素B、核糖体膜相关蛋白、细胞色素b5以及海藻糖转运蛋白等。经酵母双杂交共转验证和β-半乳糖苷酶检测进一步确认了这17个候选蛋白与BYSMV N发生互作。本研究成功从灰飞虱分离泛素酵母双杂交膜系统c DNA文库筛选到与BYSMV N互作的蛋白质,为进一步探索弹状病毒与介体昆虫的分子互作机制奠定了基础。

• 单位
  中国农业科学院植物保护研究所; 植物病虫害生物学国家重点实验室