中国流行的十二种血清型蓝舌病病毒一步法RT-PCR定型方法的建立与应用

作者：李占鸿; 宋子昂; 杨振兴; 李卓然; 廖德芳; 李华春; 杨恒^*

来源：中国兽医科学, 2020, 50(12): 1486-1493.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2020.0216

• 蓝舌病病毒
• 血清型
• RT-PCR
• 检测方法

为建立针对我国流行的12种蓝舌病病毒(bluetongue virus,BTV)血清型的特异性RT-PCR检测方法,本研究根据我国流行BTV毒株Seg-2的高度保守区域,设计出12对BTV血清型特异性扩增引物,建立了RT-PCR方法,并对该RT-PCR方法的反应条件、引物特异性与灵敏性进行了优化与验证;以我国分离的162株BTV为检测对象,对其血清型进行鉴定并构建系统发生树。结果显示,建立的BTV血清型RT-PCR具有良好的特异性与灵敏度:设计的12对引物仅与对应血清型BTV核酸模板产生特异性PCR扩增,与其余血清型毒株之间无交叉扩增现象;对不同血清型BTV核酸的检测灵敏度在1.28×102copies(BTV-2)至9.62×102copies(BTV-1)之间。对我国分离的BTV毒株的RT-PCR血清型鉴定与测序结果显示,162株BTV分属12种血清型(BTV-1、-2、-3、-4、-5、-7、-9、-12、-15、-16、-21与-24),根据Seg-2序列构建的系统发生树显示,我国流行BTV血清型毒株的Seg-2序列与对应血清型的BTV标准参考毒聚为一簇,分属9个基因群(A、B、C、E、F、G、H、I和J基因群)。本研究建立的BTV血清型特异性RT-PCR方法为我国流行BTV的检测、诊断与分子流行病学调查提供了可靠的技术手段。

• 单位
  云南省畜牧兽医科学院; 云南农业大学