MiR-146a在长波紫外线诱导人皮肤成纤维细胞光老化中作用机制的研究

作者：李晓; 李巍^*; 杨清华; 李之珩; 古桂雄^*

来源：中华皮肤科杂志, 2016, 49(03): 197-202.

DOI：10.3760/cma.j.issn.0412-4030.2016.03.011

• 成纤维细胞
• 紫外线
• 皮肤衰老
• 微RNAs
• Smad4蛋白质
• miR-146a

目的探讨长波紫外线(UVA)诱导人皮肤成纤维细胞(HSF)光老化中miR-146a的表达情况, 以及上调miR-146a表达对其靶基因Smad4及细胞光老化的影响。方法以10 J/cm2 UVA照射HSF(UVA照射组), 分别在0、3、7、14 d提取RNA, 实时定量PCR检测miR-146a的表达量。通过慢病毒转染上调miR-146a的表达(miR-146a过表达组), 在7 d、14 d后用荧光显微镜观察转染效率, 并通过实时定量PCR验证细胞内miR-146a表达量。空白对照组为正常培养的HSF(不做任何处理), miR-146a过表达组为慢病毒转染HSF后, 再用UVA照射。MTT法检测空白对照组、UVA照射组、miR-146a过表达组、miR-146a过表达组细胞增殖吸光度(A值), 实时定量PCR检测各组细胞内老化相关基因p53、p16和p21 mRNA的表达, Western印迹法检测各组细胞内Smad4蛋白表达。采用重复测量的方差分析、析因设计的方差分析进行统计学分析。结果重复测量的方差分析显示, 随培养时间的延长, UVA照射组和空白对照组miR-146a的表达量均逐渐下降(F=213.840, P<0.01);UVA照射组表达量低于空白对照组(F=52.55, P<0.01), 且照射时间越长, 下调越明显。慢病毒转染HSF后, 细胞内均有较高的荧光表达, miR-146a过表达组在第7天(10.31 ± 0.17)与第14天时(9.65 ± 0.19)的miR-146a表达量差异无统计学意义(P>0.05), 但较空白对照组(分别为8.33 ± 0.13和7.86 ± 0.11)显著增高, 组间差异有统计学意义(F=42.49, P<0.01)。析因设计的方差分析显示, UVA照射对细胞增殖活性有抑制作用(P<0.01), UVA照射组、UVA+ miR-146a组细胞增殖均分别低于空白对照组、miR-146a过表达组(P<0.01);慢病毒转染上调miR-146a的表达对细胞增殖活性也有影响(P<0.01), 但miR-146a过表达组与空白对照组差异无统计学意义(P>0.05), UVA+ miR-146a组显著高于UVA照射组(P<0.01)。实时定量PCR和Western印迹法结果显示, UVA照射可上调p21、p53、p16 mRNA的表达(均P<0.01), 同时对细胞内Smad4蛋白表达有促进作用(P<0.01);UVA照射组、UVA+ miR-146a组p21、p53、p16 mRNA和Smad4蛋白表达均分别高于空白对照组、miR-146a过表达组(均P<0.01), 而miR-146a过表达组与空白对照组相比差异均无统计学意义(均P>0.05), UVA+ miR-146a组均显著低于UVA照射组(均P<0.01)。结论在UVA诱导光老化的HSF中, miR-146a的表达受到抑制, 上调其表达能够抑制Smad4的表达, 促进光老化细胞增殖, 起到抗细胞光老化的作用。

• 单位
  苏州大学附属儿童医院